伯优 ® Direct Bescript One Step RT-qPCR Kit 是采用独有抗抑制 DNA 聚合酶、MMLV 反转录酶，配合独特的反应体系，可直接取血清、分泌物等样本用于扩增的一步法反转录定量扩增的 qPCR 预混免提取型试剂盒。使用本产品进行 RT-qPCR 反应，只需在此基础上再加入引物、探针、模板和灭菌 DEPC 水即可。
1、特异性高：采用独特的 MMLV 反转录酶和热启动酶可抑制非特异性反应，并保证多重反应的灵敏性。
2、灵敏度好：可精确定量低至 10 拷贝的模板。
3、线性范围广：可精确定量 9 个数量级。
4、通用性好：并兼容所有的荧光 PCR 仪。
5、使用方便：实验过程无需冰上操作。
储存条件
-20℃保存 12 个月，使用前充分溶解混匀。
短期使用可放 4℃保存，避免反复冻融。
注意事项
1. 本制品不含内参 ROX 染料。
2. 请穿实验服并戴一次性手套操作，以防影响人体健康。
使用方法
1. 反应液配制
反应液 成分 | 体积 | 终浓度 |
Direct One Step Probe Mix | 6μl | 1× |
Direct One Step Enzyme Mix | 2μl | 1× |
正向引物（10μM） | 0.5μl | 200nM |
反向引物（10μM） | 0.5μl | 200nM |
探针（10μM） | 0.25μl | 100nM |
模板 | 1-5μl | |
总计 | 补 ddH2 O 至 25μl | |
*1）分泌物样本如有保存液，则直接取 1 -5μl 用于上样；
*2）分泌物样本无保存液，请加 200μl 保存液后，直接取 1 -5μl 用于上样。
*3）血清样本，直接取 1 -5μl 用于上样。
2. PCR 循环条件的设定
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 反转录 | 50℃ | 20min | 1 cycle |
2 | 预变性 | 95℃ | 5min | 1 cycle |
3 | 变性 | 95℃ | 10s | 40 cycles |
4 | 退火、延伸 | 60℃ | 45s | |
步骤 4 收集荧光信号 | ||||
3. 实验结果分析
根据扩增曲线的结果进行荧光定量 PCR 数据分析。
货号 | 产品 | 规格 |
21614 | 伯优 ® Direct Bescript One Step RT-qPCR Kit | 100rxns |
500rxns |
